南宫28NG相信品牌力量,在生物医学领域中,细胞系和细胞株是基础研究和应用的重要概念。理解它们的定义和建立要求,对科研人员至关重要。
一、基本概念
1. 细胞系(Cell Line):细胞系是指在原代培养过程中首次传代成功后的细胞集合,这些细胞均来源于原初培养物中的细胞世系。
2. 细胞株(Cell Strain):通过选择或克隆形成的细胞群体,具有某种特定的性质或标志,其特性应在培养期间持续存在。细胞株可分为有限细胞株(无法持续传代)和连续细胞株(可持续传代)。在体外培养超过六个月且生长稳定的人类肿瘤细胞,可称为连续性株或系。
二、细胞系或细胞株的建立要求
对哪些体外培养群可被认可为已鉴定细胞没有统一规定,具体情况视实际而定。对于用于原代培养的细胞,只需保证供体均一,取材部位及组织类型的稳定。特别是针对长期培养和多次传代的细胞,需关注以下几点:
1. 组织来源:需提供细胞供体的物种信息,性别、年龄以及取材的组织或器官等。如为肿瘤,应明确临床与病理诊断信息。
2. 细胞生物学检测:应了解细胞的一般和特殊生物学特性,包括细胞形态、特异结构和增殖特征等。对于肿瘤细胞,需进行软琼脂培养及异体接种实验,确保其来源于原肿瘤并具恶性特征。
3. 培养条件和方法:需要说明细胞系的适宜生存环境,包括使用的培养基、血清种类及其适宜的PH值。
三、细胞建立的要点及基本流程
(一)肿瘤细胞培养技术要点
1. 取材:材料应来源于手术或活检肿瘤组织,选择活力较强的部分进行培养。取材后需尽快进行培养,若延迟可选择冻存处理。
2. 成纤维细胞排除:因肿瘤组织中常含有成纤维细胞,影响细胞生长,需通过机械刮除、或者消化等方法将其清除。
3. 提高肿瘤细胞存活率:建立肿瘤细胞系有一定难度,初步培养后需适应新环境,可采用特殊措施如合适的底物和生长因子等。
(二)人类淋巴母细胞的建株方法
1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血和2ml RPMI 1640,充分混匀后,沿管壁缓慢加入4ml淋巴细胞分离液,静置30分钟。
2. 离心1500rpm 15分钟后,提取白细胞层 (第二层) 至另一管中。用RPMI 1640洗涤白细胞两次。
3. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中,加入10μl环胞霉素和100μl EBV液,混匀后,于37℃下水浴摇匀3小时。
4. 结束后再次离心1500rpm 15分钟,将细胞接种至1ml培养基中,添加适量环胞霉素,37℃培养。
5. 观察细胞转化情况,常规进行半量换液,当细胞团块明显增多后可转至更大培养瓶中培养,并定时观察,决定换液和传代的时机。
6. 在细胞生长达到一定数量后进行冻存,保存时需进行核型分析和相关记录。
总结而言,始终遵循严谨的操作流程和标准将确保细胞系的质量与稳定性,南宫28NG相信品牌力量将持续致力于提升生物医疗研究的可靠性和创新性。