癌症细胞通过代谢重编程来适应生存环境，了解药物对代谢通路的影响能够帮助开发新疗法。本研究结合了细胞水平的代谢通量分析与分子水平的代谢组学和脂质组学技术，深入探讨了两种酪氨酸激酶抑制剂（AG-879和SU1498）对白血病细胞（THP-1）代谢调控的机制。

方法与技术

1. 细胞代谢分析：使用Seahorse XF Pro技术实时监测线粒体呼吸（OCR）和糖酵解（ECAR），评估ATP生成速率、质子漏（Proton Leak）和线粒体备用呼吸能力（SRC）。对THP-1细胞进行AG-879和SU1498的药物处理，分别持续2小时和18小时，以观察急性与长期的代谢效应。

2. 分子代谢分析：采用Bravo自动化平台进行代谢物和脂质的双相提取，结合HILIC（极性代谢物）和反相色谱（脂质）进行分离。使用Agilent Revident系统进行非靶向代谢组学与脂质组学分析，配合MassHunter软件进行数据解析与注释。

借助NovoCyte Quanteon和自动上样器Q进行细胞数目的归一化，确保后续细胞和分子代谢分析的可信度。通过这个标准化方案，我们的研究提供了一个可靠的方法来揭示药物代谢机制，为抗癌药物筛选和个性化医疗中的代谢标志物发现提供指导。

关键发现

1. 线粒体功能与代谢适应：AG-879导致线粒体解偶联（质子漏随时间增加），并完全丧失SRC，限制了细胞的适应能力；而SU1498则在短期内显著增加质子漏，但长期观察显示下降，并且降低SRC，提示细胞通过下调TCA循环来应对代谢压力。两种药物均抑制线粒体ATP生成，迫使细胞依赖糖酵解补偿，GlycoATP水平上升。

2. 代谢组学与脂质组学结果：SU1498显著改变代谢物，糖酵解中间体减少（如磷酸戊糖途径代谢物），与GlycoATP升高相关。与此同时，嘌呤代谢物（如尿苷、肌苷）的增加表明代谢重编程支持核酸合成。脂质组学方面，甘油三酯显著积累可能通过回补反应（anaplerosis）转化为脂质储存能量，而含有多不饱和脂肪酸（PUFA）的磷脂酰肌醇（PI）增加，可能对癌细胞信号通路产生影响。AG-879的影响较小，仅少数代谢物和脂质显著变化，或与SRC的完全丧失相关。

结论

结合细胞功能与分子组学数据，揭示了单一技术无法发现的代谢适应机制，例如SU1498通过甘油三酯的积累和PUFA-PI重塑来应对代谢压力。线粒体解偶联与脂代谢重编程可能成为癌细胞耐药的新靶点，为联合疗法的开发提供了新的思路。

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