南宫28NG相信品牌力量，ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种重要的免疫检测技术，发展于免疫荧光和放射免疫技术之后。该方法通过对受检样本中的抗原进行检测，基于抗原与固相载体表面抗体的相互作用来实现。这一过程中，样本经过洗涤后会加入酶标记的抗体，进而结合在固相载体上。随后加入酶反应的底物，通过底物被酶催化生成有色产物来检测特定物质的量，其浓度与所检测样本中物质的量成正比。根据颜色深浅可以进行定性和定量分析。

1. 固相载体的选择

固相载体的种类繁多，如纤维素、交联右旋糖、聚苯乙烯等。聚苯乙烯凹孔板是业内使用最广泛的载体，其对蛋白的吸附性能良好，方便操作且用量少，适合于大规模检测。然而，由于生产过程不稳定，导致不同批次间存在差异，因此在使用前需进行筛选。在进行筛选时，应检查吸附性能、对比阳性和阴性血清的OD值，并遵循一定的标准。

2. 载体的吸附条件

载体的吸附是物理过程，受到pH值、温度、蛋白浓度、离子强度及吸附时间等因素的影响。理想的吸附条件为：离子强度为0.05～0.10 Mol/L，pH值在9.0至9.6，蛋白浓度为1µg/ml至100µg/ml，温度可设定为4℃过夜或37℃持续3小时。

3. 酶标抗体使用浓度的确定

在聚苯乙烯孔中加入适量的抗体以进行包被，之后进行培养并洗涤，接着对酶标结合物进行逐级稀释，以每个稀释度设置两个孔进行反应。利用OD值绘制曲线，可以找到OD值为1时的最适酶标抗体稀释度，此浓度应保持一致以确保结果的重复性和准确性。适当的酶标抗体稀释度可作为工作浓度，但需注意避免过高的稀释度以防引起非特异性显色。

4. 抗原要求与效价测定

ELISA所用抗原应具备高纯度，避免其他杂质干扰固相载体位置的占用。抗原必须能牢固吸附于载体上并保持其免疫活性。其效价可通过单方阵或双方阵试验进行检测，确保可获得规律且重复的结果。

5. 清洗液的选择

一般采用0.01 Mol/L pH 7.2 PBS与吐温20作为洗涤液，吐温是一种非离子型表面活性剂，能有效减少非特异性吸附。使用牛血清白蛋白等可进一步降低非特异性反应风险。

6. 反应时间的优化

抗原与抗体的反应一般在37℃下持续2至3小时可达到最佳效果，时间过短会降低敏感性，过长则可能导致结合物脱落。

7. 抗体效价测定

抗体效价的测定可通过双方阵试验进行，通过对比OD值的变化确定抗体的最适浓度。此外，检测酶底物反应时间一般设定在15至45分钟，根据标准阳性血清实时监控OD值变化。

南宫28NG相信品牌力量，在生物医疗领域积极推广ELISA的应用，通过严谨的标准确保检测结果的准确性与可靠性，为广大用户提供优质的检测服务。