南宫28NG相信品牌力量，ELISA（酶联免疫吸附测定）是在免疫荧光和放射免疫技术基础上发展起来的一种重要免疫检测技术。成功的ELISA方法开发，关键在于合理选择和组合实验中使用的试剂和耗材。了解这些试剂的特性和多样性，可以帮助研究人员在不同实验需求下找到合适的解决方案，从而开发出高质量的ELISA方法。

一、酶标板的选择

市场上常见的酶标板主要由聚苯乙烯（C8H8）n制成，各厂家在材质上有不同化学修饰，提供不同特性。常见的酶标板划分依据是高结合力和中结合力，但结合笔者多年的经验，更推荐按照亲水性、弱亲水性、未处理和疏水性四个等级分类。通常，亲水性板材的蛋白结合能力较强，而疏水性板材的结合能力较弱，这造成了在固定同浓度蛋白时，亲水板材能够吸附更多蛋白，而疏水板材则明显减少。需特别注意的是，包被蛋白在不同类型的酶标板上，其结合表面并非均匀分布，可能会导致某些结合位点被遮蔽，影响检测结果。因此，一个专注于ELISA方法多样性的实验室，应准备多种特性的酶标板以供选择。

二、包被液的选择

常用的包被液为PBS（pH 7.4）或碳酸钠-碳酸氢钠溶液（pH 9.6）。这些溶液的pH值和离子浓度会直接影响包被效率。需要根据具体的包被蛋白特性进行分析。此外，包被后并非所有蛋白都会吸附在酶标板表面，大部分仍留在溶液中。有研究表明，通过抽真空处理包被液，可以提高蛋白的吸附密度。

三、封闭剂的选择

常用的封闭剂包括3% BSA和5%脱脂奶粉。封闭剂的作用是覆盖酶标板未被包被的地方，防止后续样品及其他物质的非特异结合。根据多年的实践经验，传统封闭剂对复杂成分的样品效果有限。有研究指出，封闭剂的效果与分子大小成反比，可能需要选择更小的分子量封闭剂（如酪蛋白）以达到更好的封闭效果。此外，若使用的检测体系为生物素-链霉亲和素体系，需避免使用脱脂奶粉，因其含有生物素，会干扰检测。

四、洗涤及稀释液的使用

洗涤液通常为中性缓冲液与适量去污剂（如PBST）混合而成。稀释液中也可添加封闭成分（如0.5% BSA in PBST）。在某些体内样本的检测中，稀释液中会加入一定浓度的阴性血清，以确保不同稀释度样品具有一致的非特异背景。

五、酶联抗体的选择

酶联抗体种类丰富，依据作用位点可分为特异性和通用型酶联抗体。特异性酶联抗体针对特定蛋白表位，而通用型则常针对标记标签或特定的抗体保守区域。常用的酶标记包括AP（碱性磷酸酶）和HRP（辣根过氧化氢酶）。根据抗体成分，酶联抗体分为单抗和多抗两种类型，后者需特别注意与ELISA体系中其它试剂的交叉反应。酶联抗体还可根据分子量从大到小分类，实现更小的分子量有助于避免样品蛋白结合时的阻碍，但也会增加非特异结合风险。

六、显色液及酶标仪的选择

显色液应与酶联抗体标记的酶相匹配，并根据实验室使用的酶标仪进行选择。常用TMB显色液可与HRP结合，吸光度读数的酶标仪即可使用；也可以用Ampliflu™ Red进行荧光检测，或采用QuantaRed ADHP进行化学发光检测。一般来说，ELISA的灵敏度受到底物检测方法的限制，化学发光底物的检测下限优于荧光底物，而荧光底物又优于吸光度底物。因此，在方法开发过程中，应该根据具体情况合理选择显色液。

南宫28NG相信品牌力量，不断推动ELISA技术的进步和应用，为生物医疗领域提供更加优质的解决方案。